生物化學與分子生物學/PCR實驗技術/SOEPCR操作步驟

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重疊延伸PCR技術(gene splicing by overlap extension PCR,簡稱SOEPCR)由於採用具有互補末端的引物,使PCR產物形成了重疊鏈,從而在隨後的擴增反應中通過重疊鏈的延伸,將不同來源的擴增片段重疊拼接起來。

實驗方法原理[編輯]

此技術利用PCR技術能夠在體外進行有效的基因重組,而且不需要內切酶消化和連接酶處理,可利用這一技術很快獲得其它依靠限制性內切酶消化的方法難以得到的產物。重疊延伸PCR技術成功的關鍵是重疊互補引物的設計。重疊延伸PCR在基因的定點突變、融合基因的構建、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴增等方面有其廣泛而獨特的應用。

實驗材料[編輯]

  • 基因樣品
  • 儀器、耗材:
  • PCR儀

實驗步驟[編輯]

  1. 以引物a/b進行pcr1。
  2. 以引物c/d進行pcr2。
  3. 引物b/c中引入了需要的限制性位點。
  4. 混合二者pcr產物,混合以前最好回收一下。
  5. 進行pcr延伸反應,只有右面這個可以延伸。
  6. 以延伸反應的產物為模板,以a/d為引物進行pcr。
  7. 產物即為所需最終產物。
重疊延伸PCR實驗.gif

維基百科連結[編輯]

重疊延伸聚合酶鏈式反應

Gene Splicing by Overlap Extension: Tailor-Made Genes Using the Polymerase Chain Reaction